Hepatitt serodiagnose

Legg igjen en kommentar 1,249

For å bestemme hepatittviruset, for å få informasjon om sykdommens opprinnelse, utføres tilstandene og årsakene til forekomsten, serodiagnose av hepatitt C, b, a. Identifisering av serologiske markører lar deg gjøre en diagnose og ta den riktige behandlingen. Markørene inkluderer virusproteiner, spesifikke antistoffer, som kroppen produserer som et svar på infeksjonen og virusnukleinsyrene.

Hva er det

Serodiagnosis - anerkjennelse av sykdommens etiologi ved å detektere antistoffer i blodet. Serologiske markører er sen diagnostikk, siden reaksjoner er mulige i 10-12 dager fra sykdomsutbruddet. Serodiagnostiske studier utføres til:

  • diagnostisere sykdommen - å bestemme tilstedeværelsen av antistoffer i blodet ved hjelp av standard antigener;
  • identifisere patogenet - for å identifisere ukjente antigener.

For serodiagnose bruk: bakterielle celler; plasmaceller og lymfocytter, tumor og syke celler; oppløselige ingredienser. Det er 6 grupper med serologiske reaksjoner:

  1. Reaksjoner som oppstår ved utvidelse av Ag-partikler.
  2. Komplementbindende reaksjoner og immunhemolyse.
  3. Immunofluorescensreaksjon.
  4. Anti nøytraliseringsreaksjoner
  5. Reaksjon med fagocytose.
  6. Reaksjoner av immunosorbentanalyse ved bruk av antigener og antistoffer.
Tilbake til innholdsfortegnelsen

Hva viser analysen?

Gjennomføring av serodiagnose foreskrevet til pasienter, hvis det av en eller annen grunn ikke er mulig å diagnostisere, unntatt sykdommen. Analysen identifiserer typen av patogen og bidrar til å gjøre en diagnose. Også, serodiagnosis lar deg velge det beste behandlingsalternativet. Symptomer på testing: urimelig svakhet, dårlig appetitt, kvalme, misfarging av avføring og urin, gul hud. Tidlig serodiagnose bekrefter eller nekter infeksjon og bestemmer scenen av sykdommen.

Egenskaper av serodiagnose og type hepatitt

Skalet av hvert virus har sitt eget sett med proteiner. Og aminosyrene som utgjør proteinet regnes som en slags kode sett. Denne koden er en markør for serodiagnose. Hepatitt A markører er anti-HAV IgM og IgG. Markører av hepatitt B - HBcAg, HBsAg, HBeAg. Markørene til viruset C - HBCAg. For serodiagnose av virus A brukes følgende: IEM (immunoelektronmikroskopi), CSC (komplementbindende), RIA (bruk av merket Anti og Ag), REMA (antistoffenzymreaksjon). Serodiagnose for virus B bruker RIA, REMA, RPG (nedbør i gel) og RIGA (indirekte hemagglutinasjon). RIGA bruker erytrocytter som er lastet med HBsAg. For serodiagnose av hepatitt C anvendt enzymimmunoassay.

Hepatitt A markører

Hepatitt A-studien er rettet mot å bestemme IgM og IgG. Disse indikatorene vises i blodet så snart nivået av serumenzymer i kroppen øker. Anti-HAV IgM - er en indikator på nivået av antistoffer M til hepatittviruset. Etter infeksjonen vokser indikatoren og til de første symptomene vises, vil en blodprøve vise et positivt resultat. Anti-HAV IgG - denne klassen bestemmes 10 uker etter infeksjon i kroppen. Indikatoren forblir ofte høy etter utvinning, det indikerer at prosessen med dannelse av immunitet mot type A-virus begynner.

Ved hjelp av HBsAg-markøren kan hepatitt B påvises tidlig, antigenet manifesteres ved 27-41 dager etter infeksjon i kroppen.

Hepatitt B markører

Studien tar sikte på å identifisere antigener og antistoffer. Serodiagnosis lar deg gjøre en diagnose og forutsi utfallet av sykdommen. For hvert trinn blir det oppdaget en annen HBV-markør. Under inkubasjonsperioden lagres antigenet i blodet i 2 til 5 måneder. En indikator for infeksjon er samtidig bestemmelse av HBs og HBs. Ved begynnelsen av utvinningen forsvinner HBc og HBe fra blodet, anti-HBc dannes, senere oppdages antistoffer mot alle typer antigen i blodet. Tilstedeværelsen av HbsAg indikerer infeksjon, hvis antigenet er i blodet i mer enn seks måneder, så er sykdommen i kronisk stadium. Anti-HbsAg - viser at antistoffer har dannet seg i kroppen og immunsystemet kjemper aktivt mot viruset. HbsAg oppdages en stund etter utvinning. Anti-HbcAg påvises med symptomer og fortsetter gjennom hele perioden.

I laboratorieundersøkelser oppdages to klasser av antistoffer: IgM - er syntetisert i de tidlige stadier og er et tegn på ny infeksjon eller høy aktivitet av viruset. IgG - dannet 2-3 måneder etter infeksjon, gir immunitet. HbeAg-indikatoren indikerer infeksjonsaktivitet. Pasienter som har antigener i blodet er farlige for å overføre viruset, så det må tas vare på. Når anti-HbeAg oppdages, begynner immuniteten å danne seg.

Hepatitt C markører

Hepatitt C-virus replikerer inaktivt, så det er vanskeligheter med å diagnostisere infeksjon. Den eneste måten å oppdage C-viruset er å oppdage RNA. Dens bestemmelse utføres ved enzymimmunoassay, som identifiserer mengden anti-HCV. Antistoffer oppdages 4-6 uker etter at viruset kommer inn i blodet. I løpet av denne perioden begynner dannelsen og sirkulasjonen av IgM. Etter 3 måneder begynner IgG-syntese. Langsiktig gjenkjenning av IgM indikerer aktiviteten til viruset og det kroniske stadiet av sykdommen. I kronisk form indikerer deteksjonen av IgM leverskade. Resultatet av et enzymimmunoassay er ikke grunnlag for diagnose. Metoden brukes som en screeningtest for å identifisere kronisk form. Etter å ha funnet antistoffer mot HCV og for mistanke om hepatitt C, er det nødvendig å gjennomgå en omfattende laboratorieundersøkelse.

En enzymimmunanalyse for serodiagnose kan oppdage antistoffer mot hepatitt C i 95% tilfeller av kronisk form, i den akutte form er nøyaktigheten av metoden 50-70%.

Serodiagnose har ikke 100% spesifisitet og følsomhet ved diagnosen viral hepatitt. Derfor, når du vurderer resultatene, er det nødvendig å ta hensyn til symptomene og bruke flere tester for diagnosen som bekrefter resultatet. Ved evaluering av resultatene av serologiske studier bør man ta hensyn til sykdommens historie, informasjon om tidligere sykdommer og vaksinasjoner, samt mulig kontakt med infeksjonskilden.

Serologisk diagnose av viral hepatitt

Diagnosen begynner med pasientens undersøkelse. For korrekt og rettidig diagnose av "viral hepatitt", undersøker legene først pasienten, leder ham til å ta blod og urintester.

Først av alt, tar de oppmerksomhet på slike karakteristiske symptomer på den første perioden av sykdommen som sløvhet, generell muskelsvikt, tap av appetitt, kvalme, bukhinneforstyrrelser, mørkere urinfarger, forstørrelse og fortykning av leveren, økende smertefølsomhet i nedre kant. Generelt analyserer blodsykdommer oppmerksomheten til innholdet av leukocytter, lymfocytter, ESR.

De benytter seg av biokjemiske blod- og urintester for å vurdere graden av leverskade og bekrefte om gulsott er forbundet med betennelse i leveren. Det viktigste er nivået av gallepigmentet - bilirubin, som dannes i leveren som følge av nedbrytning av røde blodlegemer.

Bilirubin er vanligvis bundet av blodproteiner og har ingen toksisk effekt på kroppsvev. Med hepatitt øker konsentrasjonen av fritt og bundet bilirubin i blodet kraftig. Når det overstiger 200-400 mg / l, blir gulsot synlig for øyet.

Hepatocytskader snakker om et økende nivå av transaminaseaktivitet - ALAT og AST, som går inn i blodet fra leverceller gjennom skadede membraner. Det er også spesielle tester for tilstanden til blodkoagulasjonssystemet, hvor proteiner som er syntetisert i leveren, er involvert. En positiv reaksjon av urin til urobilin har en diagnostisk verdi.

Bevis på nedsatt leverfunksjon er en tymol-test. En endring i protrombinindeksen karakteriserer alvorlighetsgraden av viral hepatitt, og en økning i aktiviteten av alkalisk fosfatase, totalt bilirubin, indikerer en brudd på sekresjonsfunksjonen til leveren. Reaksjonen av urin til gallepigmenter i begynnelsen av sykdommen er positiv mye mindre.

I diagnosen av liten betydning er både akutte og kroniske former for viral hepatitt gitt til ultralydsundersøkelse av bukhuleorganene. Ved hjelp av denne metoden kan legene bestemme slike endringer som ikke oppdages ved ekstern undersøkelse: forstørret lever, innsnevring av leverenveiene, indurasjon og tykkelse av veggene deres, tegn på betennelse i galleblæren og bukspyttkjertelen, utvidet portal og miltåre, forstørret milt, forstørrede lymfeknuter. Den viktigste diagnostiske metoden, spesielt kronisk hepatitt, er en leverbiopsi.

Metoder for å detektere antistoffer og antigener i blodet og andre kroppsvæsker inkluderer serologisk diagnostikk. For tidlig diagnose av viral hepatitt, inkludert anicteriske, asymptomatiske former, bestemmes tilstedeværelsen av virale proteiner (antigener, også kalt virale hepatittmarkører) eller antistoffer mot dem ved hjelp av immunoenzymanalyse (ELISA) i serum. I tillegg kompletteres ELISA når det er mulig med en polymerasekjedereaksjon (PCR), som gjør det mulig å bestemme tilstedeværelsen av virale nukleinsyrer i serum-DNA fra hepatitt B-viruset, RNA-virus av annen hepatitt, noe som er spesielt viktig for starten av rettidig behandling.

Enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) - er en universell metode for immunologisk diagnose, som i stor grad brukes i praksis. Den er konstruert for å oppdage virale proteiner (antigener) eller antistoffer som produseres av immunsystemet som svar på penetrasjon av virus i menneskekroppen. Disse proteinene er merkelige markører (merker) eller tegn, hvis tilstedeværelse gjør det mulig å foreta en nøyaktig diagnose, vurdere arten av sykdommen, hjelp legen din til å velge riktig behandling. Denne metoden er basert på den velkjente antigen-antistoffinteraksjonen.

For å identifisere antigener produserer ulike kommersielle firmaer testsystemer som er 96-brønn polystyrenplater. I bunnen av brønnene blir antistoffer forhåndsadsorberte ("suturerte") til et eller annet antigen av patogenet, for eksempel til overflateantigenet av hepatitt B-viruset-HBs-antigenet.

I første fase blir det tilsatt en prøve til hver brønn, for eksempel pasientens blodserum ved forskjellige fortynninger, som ikke inneholder fast bestemt virusprotein (antigen). Hvis dette proteinet (antigen) "gjenkjenner" sitt antistoff, oppstår bindingen deres. Dette betyr at pasientens serum inneholder antigenet, antistoffene som er sorbert på bunnen av platen.

For å se resultatene av denne reaksjonen, er det følgende stadium hvor en forbindelse blir tilsatt til "antigen-antistoff" -komplekset som binder til antistoffet. Denne forbindelsen inneholder et enzym som pepperrotperoksidase. Når et substrat legges til det, blir det sistnevnte delt, etterfulgt av farging av oppløsningen i en gulbrun farge.

Ved neste trinn vaskes hver brønn grundig fra uomsatte komponenter. I de brønner der antigenet, som i vårt tilfelle, er helt bundet til antistoffet, kan det ikke lenger interagere med den tilsatte forbindelsen.

Derfor fjernes det fra brønnen under hvitvasking. Da serumet fortynnes, reduseres innholdet av antistoffer i det, og de er ikke lenger i stand til å binde antigenet helt. I disse brønnene binder forbindelsen som inneholder enzymet til antigenet og forblir i brønnen etter vasking. I neste trinn legger du til substratet og ser resultatene av reaksjonen, som evalueres visuelt eller ved hjelp av et spektrofotometer.

Dermed fant vi at pasientens serumprøve inneholder HBs-antigen. Du kan også finne ut mengden eller titeren, bestemme den siste fortynningen av serumet, der en gul farge dukket opp. Jo større grad av fortynning, desto mer er viruset inneholdt i pasientens blod.

Tilsvarende kan tilstedeværelsen av antistoffer mot et bestemt forårsakende middel av viral hepatitt bestemmes. Bare i disse tilfellene benyttes diagnostiske testsystemer med "sydd" til bunnen av brønnene, ikke med antistoffer, men med kjente antigener. Fordelene ved denne metoden er høy følsomhet og spesifisitet, lette reaksjoner, muligheten for å undersøke et stort antall pasienter samtidig. Blant manglene i metoden er behovet for spesielt dyrt utstyr og passende personalkvalifikasjoner.

Polymerasekjedereaksjonsmetode

I moderne laboratoriediagnostikk opptar PCR et spesielt sted. PCR-metoden økte klinisk laboratoriediagnostikk til en fundamentalt annen høyde - Nivået av bestemmelse av nukleinsyrer (DNA og RNA), som muliggjør direkte deteksjon av et infeksjonsmiddel eller genetisk mutasjon i et hvilket som helst biologisk medium.

I denne PCR-metoden kan teoretisk detekteres et ønsket nukleinsyremolekyl blant millioner av andre. Fra synspunkt av klinisk medisin er definisjonen av nukleinsyre ekvivalent med påvisning av patogenet i studieobjektet.

Det er kjent fra biologi at nukleinsyrer (DNA eller RNA) har egenskapen til selvgjengivelse (reproduksjon). Dette prinsippet bygger på metoden for PCR, når denne prosessen utføres kunstig i laboratoriet. For dette isoleres en nukleinsyre først fra en vevsprøve oppnådd fra en pasient (for eksempel i tilfelle mistanke om viral hepatitt).

Det utfører rollen som en slags "matrise" som syntesen utføres på. Nukleinsyre har sin egen "imprint" - en unik sekvens av nukleotider som den består av. For hvert patogen har en slik sekvens blitt studert, en slags "kart" er blitt sammensatt.

Det viktigste elementet i PCR er primeren (korte seksjoner av DNA-komplementære (tilsvarende) til områdene av nukleinsyren isolert fra prøven). Primers gir oppstart og spesifisitet av reaksjonen.

Testsystemet for PCR består således av en blanding av nukleinsyrer i testprøven, en primer og spesielle enzymer (polymeraser) hvorigenom denne reaksjonen er umulig. PCR-analyse innebærer flere sykluser (trinn), som et resultat av hvilke eksakte kopier av en gjenkjennelig region av malnukleinsyren er oppnådd. Disse syklusene gjentas 30-50 ganger i samsvar med et gitt program. Det endelige produktet av denne reaksjonen er kjent ved gelelektroforese.

"Sensitivitet" indikator

En av de viktigste kriteriene for diagnostisk effektivitet av en laboratorieanalyse er "sensitivitetsindikatoren". Det skal skille mellom analytisk og diagnostisk følsomhet. Analytisk følsomhet, som påført PCR, er det minste antall kopier av DNA eller RNA i 1 ml prøveoppløsning, som kan bestemmes av dette testsystemet.

De fleste kommersielle testsystemer kan detektere ønsket nukleinsyre i en biologisk prøve, selv om konsentrasjonen er flere hundre eksemplarer per 1 ml prøve. Dette er knyttet til den generelle situasjonen som bestemmer klinisk egnethet til laboratoriediagnostiske metoder eller testsystemer. Metodens diagnostiske følsomhet bør ikke være lavere enn 95-98%.

Det andre universelle kriteriet for laboratorieffektivitet er "spesifisitet", som bestemmes av andelen sunne mennesker som har virkelig negative analyseresultater. PCR-metoden har høyeste spesifisitet, som når 99-100%.

Den diagnostiske følsomheten og spesifisiteten av PCR er sammenlignbare og overgår ofte de som er gitt av andre metoder som er "gullstandarden" ved diagnosen infeksjonssykdommer.

Resultatene av PCR-analyse kan oppnås innen en arbeidsdag, mens prøver tatt for analyse kan lagres (akkumuleres) i enda flere uker mens man observerer de aktuelle temperaturnormer. En sammenfattende vurdering av sensitiviteten til ulike diagnostiske metoder utført nylig i flere utenlandske forskningscentre viste at ELISA har en følsomhet på 50-70% og PCR - fra 90 til 100%.

PCR, sammenlignet med ELISA og andre metoder, har to viktige fordeler: høy følsomhet og kort analyse tid, det vil si "relevansen" for å oppnå et forskningsresultat fra en lege og pasient.

Før andre metoder for klinisk laboratoriediagnostikk er det fordeler med PCR:

- Metoden gjør det mulig å oppdage eventuelle DNA og RNA, selv i tilfeller når andre metoder brukes, er det umulig å gjøre;

- Metoden har høy spesifisitet (opptil 100%). Det skyldes det faktum at i det undersøkte materialet finnes et unikt nukleinsyrefragment som bare er karakteristisk for et gitt patogen eller gen;

- Muligheten for å gjennomføre ikke bare kvalitativ (tilgjengelighet), men også kvantitativ (konsentrasjon) vurdering av innholdet av nukleinsyre. For tiden er det ved hjelp av kommersielle testsystemer mulig å bestemme flere hundre eksemplarer i prøven under studien;

- Høy produserbarhet og automatisering av metoden gjør det mulig for legen å få resultatene av studien og dele med pasienten på analysedagen;

- PCR tillater å identifisere patogenet i kroppen før utviklingen av sykdommen, for eksempel i inkubasjonsperioden;

- for utførelse av PCR-analyse er et minimum prøvevolum tilstrekkelig (opptil flere mikroliter);

- PCR-analyse lar deg samtidig diagnostisere flere patogener i en prøve uten å påvirke følsomheten eller spesifisiteten til resultatet;

- De oppnådde resultatene av PCR kan innføres i databehandlere eller fotograferes for videre evaluering av uavhengige eksperter.

Til tross for de ovennevnte fordelene er PCR-metoden fortsatt ikke uten noen ulemper som bør vurderes ved evaluering av forskningsresultater:

- De høyeste kravene til laboratorieutstyr, kvaliteten på testsystemene og den strengeste overholdelse av forskriftens forskrifter for å unngå falske resultater. Å løse problemet med kvaliteten på analysene er mulig med passende kvalifikasjoner av personell og obligatorisk sertifisering av laboratoriet.

- tvetydig vurdering av et positivt PCR-resultat. Det er dette faktum at det ofte er et urimelig argument fra utøvere for å tvile på det oppnådde resultatet og effektiviteten av PCR-metoden. For eksempel, hos personer med DNA av patogenet som er påvist i blodet ved PCR-metoden, kan sykdommen ikke utvikle seg klinisk.

I denne situasjonen, når man vurderer PCR-analyse, bør man snakke om en smittet pasient, og ikke om utvikling av en smittsom sykdom. Metoden for PCR-analyse tillater å bestemme tilstedeværelsen eller fraværet av patogenet, svarer i stor grad på spørsmålet "behandle ikke behandle", og gjør det også mulig å vurdere kvaliteten på behandlingen ved å overvåke patogenens tilstedeværelse eller fravær. Legen, som vurderer resultatet av PCR-analysen, innser at dette resultatet ikke er det eneste argumentet i å ta beslutningen om å starte behandling eller å nekte den.

Testsystemer er utviklet for hver type viral hepatittpatogen, men den mest verdifulle metoden for PCR ble funnet i diagnosen hepatitt B, C, D, G. PCR-metoden er ekstremt viktig for diagnosen hepatitt B. Dette skyldes at Det er mutant (med endrede egenskaper), som ikke er bestemt av konvensjonelle serologiske test.

Metoden for PCR-analyse gjør det mulig å identifisere, og hvilken form er hepatitt 15-viruset, om det er i stand til uavhengig gjengivelse eller integrert (integrert) inn i DNA-en i vertscellen. Dette er av kritisk klinisk betydning, siden med den integrerende formen av denne infeksjonen, er en person ikke smittsom overfor andre (sikkerhet for seksuell partner, profesjonell kondisjon, det er ingen risiko for vertikal overføring av viruset fra mor til foster, etc.).

I tillegg er antiviral terapi ikke angitt for slike pasienter, i tillegg er det enda farlig. Men med en integrert form for infeksjon øker sannsynligheten for å utvikle leverkreft dramatisk (med mer enn 200 ganger). Slike personer må gjennomgå en omfattende klinisk, laboratorie- og instrumental undersøkelse minst en gang i året.

PCR-metoden kan fungere som en arbiter for å bestemme behovet for å starte behandlingen og overvåke effektiviteten. Den raske forsvinden av hepatitt B-virus DNA fra blod er en direkte og pålitelig test av det vellykkede resultatet av antiviral behandling.

Således er bestemmelse av HBV-DNA i plasma er en viktig analyse som i kombinasjon med andre laboratorieprøver gjør det mulig å objektivt diagnostisere infeksjon, bestemme arten av infeksjonen prosessen, for å virke som et kriterium i terapien og evaluering av dens effektivitet.

PCR-metoden har ingen like ved diagnose, prognose og vurdering av suksess for antiviral terapi av infeksjoner forårsaket av hepatitt C. Anvendelsen av PCR kan påvise hepatitt C-viruset på et tidlig stadium av infeksjonen, som HCV-RNA kan påvises i blodserum allerede en uke etter infeksjon. Med denne metoden er de genetiske variantene av dette viruset bestemt, noe som gjør at legen kan foreskrive riktig behandling.

I tilfelle av viral hepatitt D tillater PCR analysemetoden bestemmelse av viralt RNA i pasientens serum, samt blandet hepatitt B og D infeksjon. Derfor kan denne forskningsmetoden brukes til å overvåke effektiviteten av behandlingen, prognosen for kurset og sykdomsutfallet. Det er viktig for legen å avgjøre om det er en blandet infeksjon, siden hepatitt D øker den nekrotiske effekten i hepatitt B og øker dermed risikoen for utvikling.

Metoden for PCR-analyse er for øyeblikket den eneste måten å bevise tilstedeværelsen av infeksjon med hepatitt C-viruset.

Vurder bruk av diagnostiske metoder for annen hepatitt.

Hepatitt E. De viktigste diagnostiske tegn på hepatitt E-virus er: vandig antagelse transmisjonsmekanisme, pasientens alder fra 20 til 40 år, spredning hovedsakelig i regioner i tropiske og subtropiske sonen, kliniske manifestasjoner, slik som hepatitt A med utbredelsen av mild, registrering alvorlig trussel dødelig utfall hos gravide i andre halvdel av svangerskapet, sjeldnere i tidlig postpartum og hos ammende mødre (forekomme med intensiv hemolyse, hemoglobinuri, akutt nyresvikt tilstrekkelig og alvorlig trombohemoragisk syndrom). Bekrefter diagnosen av deteksjon av antistoffer i blodet.

Viral hepatitt B. Hepatitt B-leger mistanke om syk i 45-180 dager før utbruddet av sykdommen overført blod eller komponentene (erytrocytt, leukocytt, blodplate-masse) ble utført kirurgi, studier av interne, multippel injeksjon (omfattende medikament ), eller som skjer mye sjeldnere hvis pasienten har hatt seksuell eller nær kontakt med en pasient med hepatitt B. Kriteriet for tidlig bekreftelse av diagnosen er deteksjon av HBs, HBe og HBc antigener i blodet og viralt DNA.

Serologiske markører for akutt hepatitt B

Hepatitt C. I motsetning til hepatitt B, i diagnosen av hvilke antigen- og antistoffmarkører som er tatt i betraktning, med hepatitt C, blir bare antistoffer fanget av ELISA, som er forbundet med lav konsentrasjon av viruset i blodet. Hepatitt C-virusantigener kan påvises i leverbiopsiprøver.

Laboratoriediagnostikk omfatter tre hovedtyper av tester.

Serologiske markører for akutt hepatitt C

Påvisning av antistoffer. Til tross for høy spesifisitet er moderne diagnostiske enzymimmunoassay-systemer ikke forsikret mot overdiagnose, det vil si forsinkelses-positive resultater. For å utelukke dem krever det også en vurdering basert på resultatene av analyser oppnådd ved forskjellige tidsintervaller. Falske negative resultater er også mulige når antivirale antistoffer ikke kan påvises, til tross for tilstedeværelsen av et virus i kroppen. Dette skjer i følgende tilfeller:

- den første sykdomsperioden

- mens pasientene tar immunsuppressiva midler - legemidler som undertrykker immunforsvaret;

- ved infeksjon med noen genotyper (først og fremst 3 og 4).

For tiden blir kommersielle testsystemer produsert for å oppdage antistoffer mot hepatitt C-viruset av den første genotypen. Imidlertid kan slike tester ikke være tilstrekkelig effektive for pålitelig påvisning av antistoffer når de er smittet med et virus av en annen genotype. Dette er av stor betydning for regioner der andre typer viruser hersker. En svært sensitiv test som kan reagere med antistoffer mot hepatitt C-viruset av en hvilken som helst genotype, kreves derfor for effektiv diagnostisering av hepatitt C.

Bestemmelse av viralt RNA. Hepatitt C-virus-RNA er detektert for diagnostiske formål. Hittil er denne testen vurdert som "gullstandard" ved diagnosen hepatitt C. For dette er den klassiske versjonen av polymerasekjedereaksjonen (PCR) mest brukt. Med hjelpen er det mulig å overvåke reproduksjonen av viruset, samt å dømme dets tilstedeværelse i leveren og andre vev. Bestemmelse av RNA som oftest brukt for å bekrefte resultatet av deteksjon av antistoffer, noe som utgjør en tidlig diagnose av akutt hepatitt (viralt RNA kan påvises allerede i 7-21 dager etter infeksjon, det vil si lang før det første antistoff), for å overvåke den gravide perinatal infeksjon og overvåke effekten av antiviral terapi.

Dataene fra disse to tester utfyller hverandre godt. Positive resultater av PCR-analyse i kombinasjon med negative resultater for antivirale antistoffer er karakteristiske for noen perioder med akutt hepatitt. Negative indikatorer for PCR-analyser på bakgrunn av positiv antistoff-test kan skyldes lav (ikke-påviselig i PCR) viruskonsentrasjon i blodet. Gjentatte positive PCR blodprøver reflekterer aktiveringen av viruset i leverenes celler eller andre organer.

Også PCR brukes til å oppdage viruset i levervev tatt under biopsi. Dette gir mer fullstendig informasjon om utviklingen av den smittsomme prosessen, siden viruset kan holde seg i hepatocytter i lang tid uten å gå inn i blodet eller være tilstede i det i lave konsentrasjoner. Dette forekommer oftest i de tidlige stadiene av infeksjon, men observeres også i kronisk hepatitt.

Bestemmelse av proteiner (antigener) av virus av hepatitt C. Den teoretiske muligheten for detektering av hepatitt C-virusproteiner ble etablert kort tid etter oppdagelsen av viruset som studeres immunofluorescens-vev tatt fra leveren til pasienter med kronisk hepatitt C mennesker og sjimpanser infisert med viruset.

Bestemmelsen av virale proteiner (antigener) i serum på grunn av deres lave innhold var ikke mulig i lang tid. Bare nylig har metodologiske tilnærminger blitt utviklet for immunofermental deteksjon av internt C-protein i blodet, og produksjonen av de første kommersielle testsystemene er blitt organisert. Deres introduksjon i praksis vil tillate å løse kontroversielle problemstillinger av diagnostikk på en mer økonomisk basis enn definisjonen av viralt RNA. Å bestemme nivåene av AlAT er den billigste metoden for å vurdere aktiviteten i løpet av hepatitt C. Imidlertid kan en gang oppnådd data ikke være tilstrekkelig til å bestemme alvorlighetsgraden av sykdommen.

Mer viktig informasjon om leverskade kan gis ved å bestemme konsentrasjonen av ALT i flere måneder. For å få informasjon om omfanget av leverskade som ikke er tilgjengelig med andre forskningsmetoder, kan en lege gi leverbiopsi. Dataene som er oppnådd som følge av denne prosedyren, gjør det mulig å bestemme seg for å starte eller avbryte antiviral behandling.

Artikkelen bruker materialer fra åpne kilder: Forfatter: Trofimov S. - Bok: "Sykdommer i leveren"

ABSTRAKT Marker diagnose av akutt og kronisk hepatitt B og C

Federal Education Agency

Statlig utdanningsinstitusjon med høyere faglig utdanning

Ulyanovsk State University

Institutt for medisin, økologi og fysisk kultur

Institutt for smittsomme og venereale hudsykdommer

Disciplin "Smittsomme sykdommer"

Markørdiagnostikk av akutt og kronisk hepatitt B og C.

Head. Avdeling: Professor.

Federal Education Agency

Statlig utdanningsinstitusjon med høyere faglig utdanning

Ulyanovsk State University

Institutt for medisin, økologi og fysisk kultur

Institutt for smittsomme og venereale hudsykdommer

Påvisning av serologiske markører av viral hepatitt. 3 sider

Serodiagnose av viral hepatitt B............................... 4 sider

Serodiagnose av viral hepatitt C.....................................10 s

Liste over brukt litteratur................................. 19 s.

Federal Education Agency

Statlig utdanningsinstitusjon med høyere faglig utdanning

Ulyanovsk State University

Institutt for medisin, økologi og fysisk kultur

Institutt for smittsomme og venereale hudsykdommer

Påvisning av serologiske markører av viral hepatitt

For å etablere viral karakter av hepatitt og å oppnå informasjon om dets etiologi er det bare mulig å identifisere serologiske markører av hepatittvirus. Slike markører inkluderer virale proteiner (antigener), spesifikke antistoffer produsert av kroppen som svar på en infeksjon, og virusnukleinsyrer (DNA eller RNA), som representerer dens genom. Kombinasjonen av metoder for å detektere spesifikke virale eller bakterielle proteiner (antigener) eller antistoffer fremstilt i verten i nærvær av ett eller annet patogen i biologiske vev og fluider refereres til som immunologiske metoder for laboratorieanalyse. De siste tiårene har immunologiske forskningsmetoder blitt utbredt. Årsaken til dette var den tette fusjonen av immunologi og bioteknologi, noe som gjorde det mulig å utvikle og sette i bruk et bredt spekter av testsystemer basert på samspillet mellom antigen-antistoff. For viral hepatitt, refererer ELISA til indirekte metoder for å oppdage patogenet, slik at man kan etablere etiologien av sykdommen. Relativt nylig har metodene for genodiagnostikk, som tillater deteksjon og karakterisering av gener eller ikke-sansiske DNA- og / eller RNA-sekvenser, blitt vanlig praksis i kliniske diagnostiske laboratorier. Deres utvikling skyldes utviklingen i 1983 av prinsippet om polymerasekjedereaksjonen (PCR). De første rapportene om den praktiske anvendelsen av PCR dukket opp i 1985, og siden da har antall publikasjoner hvor PCR brukes som en av forskningsmetodene, et av de første stedene i verdens vitenskapelig litteratur. Disse tilnærmingene gjelder for påvisning og undersøkelse av smittsomme genomer

Federal Education Agency

Statlig utdanningsinstitusjon med høyere faglig utdanning

Ulyanovsk State University

Institutt for medisin, økologi og fysisk kultur

Institutt for smittsomme og venereale hudsykdommer

agenter, deteksjon av markører av onkologiske sykdommer, påvisning av genetiske forandringer i det humane genom som er assosiert med visse funksjonsforstyrrelser. I motsetning til ELISA refererer PCR-analyse til direkte metoder for å detektere patogenet i klinisk materiale, noe som gjør det mulig å evaluere aktiviteten av den virale prosessen og å spore prosessene for spredning av patogenet i forskjellige organer og vev.

Serodiagnose av viral hepatitt B.

Hepatitt B-virus (hepatitt B-virus, HBV) tilhører familien Hepadnoviridae. Virusets genom er representert ved et delvis doblet sirkulært DNA-molekyl på 3200 bp i størrelse. Under lysmikroskopi ser HBV ut som en sfærisk partikkel med en diameter på 42 nm (dansk partikkel) som består av en nukleoidformet nukleoidformet som en icosahedron med en diameter på 28 nm, innvendig som det er et dobbeltstrenget DNA, terminal protein og DNA-polymeraseenzym. Nukleoidproteinet inneholder HBcAg og HBeAg. Ytre skallet (7 nm tykt) dannes av HBV-overflateantigenet - HBsAg. Hepatitt B-viruset er et pseudoretrovirus, dvs. dets DNA kan delvis settes inn i hepatocytgenomet.

Med AVH og forverring av kronisk hepatitt, kan viruspartikler detekteres i pasientens hepatocytter og serum. Med den integrerende formen for kronisk hepatitt B og i remissiefasen oppdages ikke HBV i serum. Basis for laboratoriediagnose av HBV-infeksjon er bestemmelse av serologiske markører for virusinfeksjon: HBsAg, HBeAg, anti-HBc klasse IgM og IgG, anti-HBe og anti-HBs, HBV DNA og viral DNA polymerase aktivitet. Avhengig av løpet av viral hepatitt B ser spekteret av endringer i serologiske markører forskjellig ut.

Federal Education Agency

Statlig utdanningsinstitusjon med høyere faglig utdanning

Ulyanovsk State University

Institutt for medisin, økologi og fysisk kultur

Institutt for smittsomme og venereale hudsykdommer

HBsAg er en viktig markør for HBV-infeksjon. I akutt viral B kan i de fleste tilfeller (90-80%) HBsAg detekteres i inkuberingsperioden, fra den femte uke av infeksjon. Gjennomsnittlig varighet av antigelsirkulasjon er 70-80 dager. Den raske forsvinden av HBsAg (i de første dagene av gulsott) med utseendet av antiBB er et dårlig prognostisk tegn. Ved kronisk hepatitt B kan HBsAg sirkulere i pasientens blod over mange år. Det skal bemerkes at nåværende metoder for bestemmelse av HBsAg, inkludert ELISA, har en terskel av følsomhet. Derfor, i nærvær av kliniske tegn på hepatitt og fravær av HBsAg i serum, er det derfor nødvendig å undersøke andre markører for HBV-infeksjon. Tilstedeværelsen av HBsAg i blodet indikerer tilstedeværelsen av et virus i leveren og er svært sannsynlig i blodet. Ikke hvert serum som inneholder HBsAg inneholder hepatitt B-viruset. I noen tilfeller er virus-DNA ikke fullt integrert i hepatocytt DNA, men delvis, bare av regionen som koder for HBsAg-syntese. I disse tilfellene syntetiseres HBsAg uten andre komponenter i virionen (det vil si uten andre antigener). Det antas at denne situasjonen oppstår når den "sunne" bæreren HBsAg. HBeAg av hepatitt B-viruset karakteriserer høy infeksibilitet av blodet, som er en indikator for aktiv replikasjon av HBV. HBeAg sirkulerer i pasientens blod bare i nærvær av HBsAg. I den første uken i isterperioden oppdages det hos 85-95% av pasientene. Deteksjon av HBeAg i to måneder eller mer tjener som et prognostisk tegn på utviklingen av kronisk hepatitt. I de fleste pasienter med kronisk hepatitt med høy aktivitet i HBeAg-prosessen, varer det lenge (opptil flere år). Antistoffer mot nukleært antigen av hepatitt B-virus klasse M (anti-HBc IgM) - en markør for aktiv replikasjon av HBV og akutt infeksjon. Identifisert 1-2 uker etter oppdagelsen av HBsAg og vedvarer i 2-18 måneder. Hos 4-20% av pasientene med akutt hepatitt B er anti-HBc IgM den eneste markøren for infeksjon. ved

Federal Education Agency

Statlig utdanningsinstitusjon med høyere faglig utdanning

Ulyanovsk State University

Institutt for medisin, økologi og fysisk kultur

Institutt for smittsomme og venereale hudsykdommer

CG I anti-HBc IgM kan detekteres hos enkelte pasienter med lavere titre enn ved akutt infeksjon, med antistofftiter som reflekterer alvorlighetsgraden av hepatitt. Antistoffer mot HBcAg klasse G (anti-HBc IgG) vises nesten samtidig med anti-HBc IgM. Som regel forblir de med alle personer som har hatt hepatitt B for livet. Anti-HBc IgG sirkuleres sammen med HBsAg i 95% HBsAg-bærere. Antistoffer mot HBsAg (anti-HBs) indikerer tidligere infeksjon eller forekomst av immunisering etter vaksinering (beskyttelsesnivå - 10 IE / ml). De opptrer i gjenopprettingsperioden, 4 uker etter HBsAgs forsvunnelse, og når en maksimal konsentrasjon i 1-2 år, etterfulgt av en gradvis reduksjon i nivået utilgjengelig for deteksjon ved moderne diagnostiske metoder. I noen tilfeller kan anti-HBs sirkulere for livet. Utseendet til anti-HBs mot bakgrunnen av klinisk forbedring hos en pasient med hepatitt B er et godt prognostisk tegn. Det er viktig å merke seg at i dynamikken ved akutt HBV-infeksjon er det et "vindu" når HBsAg ikke lenger er definert, og anti-HBs er ikke fremstilt ennå. Samtidig påvises anti-HBc IgM og IgG. Det følger av dette at det er nødvendig å undersøke pasienter med AVH for anti-HBc IgM selv med negative resultater av HBsAg- og anti-HBs-studien. Antistoffer mot HBeAg (anti-HBe) vises i blodet etter eliminering av HBeAg og fullføring av viral replikasjon. Ved slutten av 9. uke i den akutte perioden med hepatitt B har mer enn 90% av pasientene anti-HBe. Under gjenopprettingsperioden kan anti-HBe forsvinne. Tilstedeværelsen av anti-HBe er imidlertid ikke en indikasjon på fraværet av infeksjon i et bestemt serum. Det har vist seg at i en rekke pasienter under utviklingen av hepatitt B (ca. 10%), under påvirkning av "immuntrykk" på viruset, oppstår mutante former som "unngår" immunovervåkning og elimineres ikke. En mutant ble isolert fra bærere av anti-HBe, ikke i stand til å produsere HBeAg på grunn av defekter i precoreområdet og ble betegnet HBeAg-negativ. Utseendet til en HBeAg-negativ mutant fører til utviklingen av leverskade når

Federal Education Agency

Statlig utdanningsinstitusjon med høyere faglig utdanning

Ulyanovsk State University

Institutt for medisin, økologi og fysisk kultur

Institutt for smittsomme og venereale hudsykdommer

Fortsatt viral replikasjon (tilstedeværelse av HBV DNA i serum). Den primære infeksjonen med HBeAg-negativ mutant øker risikoen for fulminant hepatitt betydelig. De beskrevne hepatitt B markører undersøkes ved hjelp av ELISA. Spekteret av antistoffer (anti-HBe, anti-HBs, anti-HBc IgM, anti-HBc IgG) og antigener (HBsAg, HBeAg) tillater deg å etablere diagnosen hepatitt B og bestemme sykdomsstadiet (Tabell 3). Ulempen med denne metoden er at det er umulig å bruke den i infeksjonen med mutante former av viruset, med immunosuppresjon (kreftpasienter, rusmisbrukere etc.) og for den kvantitative vurdering av patogenet som finnes i kroppen. Løsningen av disse problemene ble mulig som følge av innføring av molekylærbiologiske metoder i praksis av kliniske diagnostiske laboratorier.

Tabell 3. Ulike kombinasjoner av serologiske markører av hepatitt B-virusinfeksjon og deres tolkning

Serologisk diagnose av viral hepatitt

m. Chisinau, Blvd. Traian 7/1 kort

022 944 944 069 944 944 069 944 949
Mandag - fredag ​​fra kl. 07.30 til 19.00, lør 8.00 til 13.00

Hvis det ikke er nok kliniske og epidemiologiske data for å forutse etiologien av hepatitt, undersøkes følgende serologiske markører i første fase:

  • HAVAb, IgM (akutt hepatitt A)
  • HEVAb, IgM (akutt hepatitt E)
  • HBsAg, HBcAb (hepatitt B)
  • HCVAb (hepatitt C)

I tilfelle en positiv reaksjon på HBsAg og (eller) totalt HBcorAb er det nødvendig å avklare diagnostikk av infeksjonsprosessen, testing:

Langvarig persistens av HBcorAb, med negative tester av HBsAg og HBsAb, kan være den eneste markøren for kronisk infeksjon med en mutant stamme av hepatitt B.

Diagnose av saminfeksjon eller superinfeksjon med hepatitt Delta-viruset:

For en positiv reaksjon på HCVAb er det nødvendig med ytterligere forskning:

  • HCVAb, IgM
  • HCVAb proteinspektrum i ELISA eller immunoblot
  • HCV, RNA

For å vurdere prognosen for hepatitt C og responsen på interferonbehandling, anbefaler vi at du skriver HCV.

Diagnostiske markører av viral hepatitt og klinisk tolkning av resultatene

markør

definisjon

Klinisk tolkning

Hepatitt A markører

Hepatitt E markører

Hepatitt B markører

Hepatitt D markører (delta)

Hepatitt C markører

Hepatitt G markører

Anbefalt mengde før vaksinasjonsundersøkelse:
Før vaksinering av hepatitt B-viruset er det nødvendig å gjennomføre en studie:

Identifikasjon av en høy titer av beskyttende antistoffer: HBsAb indikerer at infeksjonen allerede er overført, at det er stabil immunitet og at det ikke er behov for vaksinering. Positive reaksjoner på HBsAg og HBcAb som indikerer tilstedeværelse av infeksjon krever en individuell beslutning om hensiktsmessigheten av introduksjonen av vaksinen.

Kilde: USAID, Ministerul Sanatatii al Republicii Moldova. Diagnostik av laboratoriet av Hepatitelor virale B, C og D. Instruksjonsmetode, 2007

I tilfelle av negative reaksjoner ved påvisning av markører av viral hepatitt A, B, C og D, bør hepatitt forårsaket av Epstein-Barr-virus og cytomegali utelukkes:

  • CMV, IgG
  • CMV, IgM
  • EBV tidlig antigen, IgG
  • EBV Nuclear Antigen, IgG
  • EBV VCA (capsid antigen), IgG
  • Epstein Barr Virus VCA (capsid antigen), IgM

LABORATORIUM DIAGNOSTICS OF VIRAL HEPATITIS

A. A. Asratyan Institutt for epidemiologi og mikrobiologi N.F.Hamal og RAMS,
Moscow Medical Academy. IMSechenov

Grunnlaget for laboratoriediagnose av viral hepatitt er:

- kjennskap til deres patogener og replikasjon

- Informasjon om utseendet og forsvinden av infeksjonsmarkører

- moderne immunokjemiske og molekylære biologiske metoder for å detektere antigener, antistoffer og nukleinsyrer /

Laboratoriediagnostikk av hepatitt B (HS) Strukturen av virionen, se figur. 1.

Laboratoriediagnostisering av HBV er basert på identifisering av HB antigener som er spesifikke for og relevante antistoffer i blodet, så vel som virale nukleinsyrer, hvorav de viktigste er:

anti-HBs klasse Ig M og IgG

NVE Ag - anti-NVE

Den mest brukte i diagnosen av HBs er definisjonen av HBsAg. Dette antigenet oppdages i både akutte og kroniske sykdommer (imidlertid er akutt infeksjon vanligvis bekreftet av nærvær av høyt titers anti-HBc IgM). I akutt HBV detekteres overflateantigenet av viruset etter 3-5 uker fra infeksjonstidspunktet, det vil si lenge før utbruddet av kliniske tegn på sykdommen og i disse tilfellene er den eneste serologiske markøren. HBsAg oppdages konstant i de preicteric og icteric periodene av sykdommen. Persistensen av HBsAg i 6 måneder eller mer indikerer et langvarig eller kronisk forløb av sykdommen, og foreslår en kronisk bærestatus for viruset. Eliminering av HBsAg og utseendet av antistoffer mot det er en uunnværlig tilstand for utvinning. Serologiske markører for HBV-replikasjon er anti-HBs av IgM-klassen, HBeAg, DNA og DNA-polymerase, som detekteres i akutt HBV fra de første dagene av kliniske manifestasjoner og kan detekteres under eksacerbasjon av kronisk HBV. Serologiske markører for HBV-replikasjon bestemmes både for generell diagnostikk og for evaluering av effektiviteten av den brukte terapien. HBcAg detekteres i leveren vev og detekteres ikke i serum. Formidlet av dets tilstedeværelse i kroppen reflekterer sirkulerende antistoffer - anti-HBc klasse IgM og IgG. I den akutte perioden med HB er tilstedeværelsen av anti-HBc klasse IgM en ytterligere markør for denne sykdommen. Imidlertid er det nødvendig å ta hensyn til at ca. 50% av pasientene med kronisk hepatitt B også kan ha disse antistoffene i perioden for eksacerbasjon, men oftere i lave konsentrasjoner. Tilstedeværelsen av bare anti-HBc klasse IgG i serum observeres mellom forsvinden av HBsAg og dannelsen av anti-HBs. Den kombinerte deteksjon av anti-HBc klasse IgG i lav titer med anti-HBs indikerer en overført HB infeksjon og tilstedeværelsen av immunitet. Testing av HBeAg utføres kun i blodsera med tilstedeværelse av HBsAg, og det positive resultatet av denne markøren indikerer en aktiv prosess - enten bekrefter diagnosen akutt HBV eller indikerer en forverring av kronisk HB. Varigheten av sirkulasjonen av HBeAg har en viktig prognostisk verdi: Identifikasjonen av HBeAg 2 eller flere måneder etter sykdomsutbruddet indikerer en mulig utvikling av kronisk hepatitt. Påvisningen av HBeAg uten tilstedeværelse av HBsAg i serum indikerer i de fleste tilfeller et falskt resultat av analysen. Imidlertid kan pasienter infisert med mutantviruset forbli seronegative for HBeAg, til tross for vedvarende infeksibilitet og tilstedeværelse av anti-HBe. Tilstedeværelsen av HBV DNA (den mest sensitive markøren for kontinuerlig HBV replikasjon) i serum indikerer en høy infeksibilitet av denne prøven og aktiv reproduksjon av viruset i kroppen. Et positivt resultat kan registreres hos nesten alle pasienter med akutt HBV midt i sykdommen. Å redusere konsentrasjonen i behandlingen av kronisk hepatitt er et godt prognostisk tegn som indikerer effekten av den brukte terapien. Den høye aktiviteten til serumaminotransferaser reflekterer inflammatorisk skade på leveren vev, forårsaket hovedsakelig av reaksjoner av kroppens immunsystem mot hepatocytter infisert med viruset, og ikke av den direkte cytopatiske effekten av viruset. Et høyt nivå av HBV-DNA i kombinasjon med et lavt nivå av aminotransferaser indikerer en utilstrekkelig immunrespons av organismen. Påvisning av anti-HBe i fravær av HBeAg og HBV DNA indikerer at aktiv replikasjon av infeksjonen er avsluttet. Serokonversjon av HBsAg i anti-HBs forekommer hos 90-95% av pasientene med akutte HBs i stadium av oppløsning av infeksjonsprosessen og er en indikator for immunitet mot HBV-viruset, det vil si at tilstedeværelsen av anti-HBs indikerer en infeksjon og tilstedeværelse av immunitet mot denne infeksjonen. Personer som har disse antistoffene i en beskyttende konsentrasjon (10 IE eller mer), lider ikke av HS og trenger ikke å bli vaksinert. Alle anvendte forskningsmetoder for bestemmelse av bestemte markører av HB kan deles inn i 2 grupper - immunokjemisk og molekylærbiologisk. Immunokjemisk - hovedstedet tilhører enzym-koblet immunosorbentanalyse (ELISA) med høy følsomhet og spesifisitet, enkel implementering og stabilitet av reagenser. Molekylær biologisk punkt og flytende hybridisering, så vel som kjedepolymerase-reaksjonen (PCR) - lar deg oppdage tilstedeværelsen av HBV-DNA, enten ved å bestemme det virusspesifikke enzym-DNA-polymerasen. HB sAg / anti-HB s For å identifisere hovedmarkøren for HBV har en rekke metoder blitt utviklet for å bestemme antigenet i konsentrasjoner på opptil 0,05 ng / ml, som er delt inn i såkalte "generasjoner" (tabell 1). Foreløpig er hovedmetoden for å oppdage HBsAg ELISA. Et viktig skritt i utviklingen av laboratoriediagnostikk av viral hepatitt i Russland har vært gjennomføringen (siden 1998) av sammenlignende tester av diagnostiske produkter for å vurdere kvaliteten i regi av Helse-departementet i Russland. Moderne diagnostiske produkter har høy spesifisitet, men falske positive resultater er mulige. For å skille falske positiver fra virkelig positive resultater, benyttes en nøytraliseringstest av HBsAg, et bestemt serum. Grunnleggende nytt for HBsAg-deteksjonssystemet var kravet til innenlandske produsenter av diagnostiske legemidler - obligatorisk inkludering i testsystemet av en svakt positiv kontrollprøve som inneholdt HBsAg i en konsentrasjon på 1 ng / ml. For å bestemme anti-HBsAg ble hele spekteret av immunokemiske metoder testet, hvorav den viktigste er ELISA (for kvalitativ og kvantitativ analyse). Anti-HBc klasse Ig M og IgG, HBe Ag - anti-HBe (Fig. 2 og Tabell 2) For å teste disse markørene, kan forskjellige typer immunfag i fast fase brukes: immunoenzym, radioimmunoassay, kjemiluminescerende og deres forskjellige varianter. HBV-DNA bestemmes ved PCR-analyse. For tiden er de mest brukte amplifikasjonsmetoder for å oppdage HBV DNA. Nå er det mulig å bestemme HBV DNA i kvalitativ og kvantitativ form.

Laboratoriediagnostisering av hepatitt D (DG) Hepatitt D-viruset (IOP) er et defekt virus som inneholder et enkelt-helisk RNA som trenger hjelp av HBV-viruset til replikasjon for å syntetisere konvoluttproteiner bestående av HBsAg, som brukes til å inkapslere IOP-genomet. IOP tilhører ikke noen av de kjente familiene av animalske virus, med dens egenskaper IOP er nærmest viroids og satellittvirusene av planter. Laboratoriediagnose utføres ved å detektere serologiske markører av IOP, inkludert nærvær av antigen, antistoffer mot det og IOP-RNA. Påvisning av IOP-antigen og IOP-RNA i serum eller levervev indikerer tilstedeværelsen av aktiv HG-infeksjon, men det bør bemerkes at disse markørene ikke kan detekteres i serum hos pasienter med fulminant HD. Markøren for aktiv IOP-replikasjon er også anti-IOP klasse IgM. Serologiske markører av HD-infeksjon avhenger av hvordan viruset ble kjøpt - i form av saminfeksjon med HBV (i de fleste pasienter har sykdommen et akutt kurs og ender i utvinning) eller superinfeksjon hos pasienter med kronisk HBV-infeksjon (det er vanskeligere enn coinfeksjon - 10% utvikles fulminant hepatitt). Når de fleste er smittet, oppdages antistoffer - anti-IOP klasse IgM og IgG i løpet av sykdommen. Anti-IOP-titeren blir vanligvis redusert til nesten uoppdagbare nivåer etter utvinning, og ingen serologiske markører forblir at en person noen gang har blitt smittet med IOP. IOP antigen oppdages hos bare 25% av pasientene og forsvinner vanligvis ved forsvunnelse av HBsAg. Når det er superinfisert hos pasienter med kronisk HBV-infeksjon, har det serologiske bildet følgende karakteristiske trekk: - HBsAg-titeren reduseres med tiden IOP-antigenet ser ut i serumet; - IOP-antigen og RNA-IOP fortsetter å bli detektert i serum, som vanligvis hos de fleste pasienter med HG-superinfeksjon (70-80%) utvikler kronisk infeksjon, i motsetning til tilfeller av coinfeksjon; - Høye antistofftitere (anti-IOP) av både IgM-klassen og IgG er bestemt, som vedvarer ubestemt. Serologiske markører av virus-DG bestemt ved enzymimmunoassay og radioimmunoassayanalyse og RNA-IOP - ved fremgangsmåten for polymerasekjedereaksjon. Innenlandske og utenlandske industrielle bioteknologiske bedrifter produserer diagnostiske sett, inkludert alle nødvendige komponenter og reagenser for testen. I diagnostiske preparater blir et delta-antigen avledet fra marmotleveren eksperimentelt infisert med HD anvendt; antigen isolert fra leveren av døde bærere av IOP; Delta antigen, oppnådd ved genteknisk metode.

Laboratoriediagnostisering av hepatitt C (HS) Oppdagelsen av HS-kausjonsmiddelet har blitt mulig på grunn av molekylærbiologiske metoder i 1989-1991. For det første ble virusgenomet oppnådd ved kloning fra serum hos pasienter med hepatitt "ni-A, ni-B", og da ble selve virusets struktur etablert. Den fysisk-kjemiske karakteriseringen av viruset gjorde det mulig å klassifisere HCV som en familie av flavovirus. Genomet av HS-viruset (HCV) er representert ved enkeltstrenget positivt RNA, som består av 10.000 nukleotidbaser, som danner regioner som koder for tre strukturelle proteiner (C, El, E2) og fem ikke-strukturelle (NS2, NS3, NS4, NS5). En funksjon av HCV er den ekstremt høye heterogeniteten av dens genom. Analyse av RNA-HCV nukleinsyrer av forskjellige isolater viste betydelige forskjeller i deres primære struktur. Basert på disse dataene ble en klassifisering av HCV bygd, som delte dem i varianter (6-9) og subtyper-genotyper, hvorav noen er tilstede i alle regioner i verden, og andre bare i enkelte land. Laboratoriediagnostikk av HS ble løst ved hjelp av moderne molekylærbiologiske metoder, gitt at når HS er viruset i ekstremt lave konsentrasjoner og dets antigener ikke er tilgjengelige for deteksjon ved hjelp av moderne indikasjonsmetoder, er forskernes innsats fokusert på å detektere antistoffer mot forskjellige antigene komponenter av viruset, hvor deteksjonen kan Angi forekomst av et virus. De anvendte antigenene var proteiner kodet av den strukturelle og ikke-strukturelle sone av RNA-HCV, oppnådd ved hjelp av rekombinant teknologi eller syntese (polypeptidene anvendt i moderne immunologiske metoder er C22-3; C33c, C100-3, C200, NS5, S-1-1 ). Laboratoriediagnostisering av HS er basert på deteksjon av serologiske markører av HCV: antistoffer mot HS-viruset (anti-HCV, anti-HCV IgM, IgG) ved ELISA og RNA-HCV ved PCR. Hittil har 4 generasjoner testsystemer blitt utviklet for å oppdage anti-HCV i ELISA-metoden, men den første generasjonen ELISA er for tiden ikke brukt på grunn av lav følsomhet. RNA-HCV er en indikator på aktiv replikasjon av HCV og den tidligste infeksjonsmarkøren, og kan detekteres ved polymerasekjedereaksjonen så tidlig som 1-2 uker etter infeksjon, kort før økningen i serumtransaminase-nivåer. Anti-HCV påvises ved 5-6 uker etter utbruddet av hepatitt i 80% tilfeller og ved uke 12 hos 90% av personer som bruker enzymimmunoassay. Ved bestemmelse av anti-HCV er det i noen tilfeller registrert en falsk positiv reaksjon. For å skille falske positive prøver fra prøver som faktisk inneholder antistoffer mot HCV, har det blitt utviklet ytterligere tester - rekombinant immunoblotting, bestemmelse av spekteret av anti-HCV-proteiner. Immunoblottende diagnoser tillater å ekskludere ikke-spesifikke resultater oppnådd ved ELISA, men en visuell vurdering av immunoblottende bånd kan være tvetydig i forskjellige diagnostiske sentre. I vårt land har immunforsvarstestsystemer (de såkalte Spektr-systemene), som er basert på deteksjon av antistoffer mot spesifikke virale antigener: kjerne, NS3, NS4ab, NS5a, blitt mer utbredt. Deteksjon av HCV RNA betraktes som "gull" -standarden i diagnosen HS og bekreftelse på positive resultater av anti-HCV-deteksjon. For tiden brukes PCR i kvalitativ og kvantitativ form for å indikere HCV RNA. Sensitiviteten til metoder for å bestemme HCV RNA øker hvert år, og nå nå 10-50 kopier av RNA i 1 ml blod. Diagnosen av kronisk HS hos individer med anti-HCV fremstilles vanligvis på grunnlag av forhøyede leverprøver i mer enn 6 måneder.

Laboratoriediagnostikk av hepatitt A (HA) HA-viruset (figur 3) er et RNA-holdig 27 nm virus, klassifisert som pikoravirus. I alle isolater samlet inn i forskjellige deler av verden, er det bare en HAV serotype. HAV har ikke ytre skall, men består av en ytre proteinkapsel eller kapsid, som inneholder positiv enkeltstrenget RNA inni, som fungerer som en mal for produksjon av virale proteiner i vertscellen. Laboratoriediagnosen av HA er basert på deteksjon av markører av HA-viruset - HAV-antigen, antistoffer (anti-HAV IgM og IgG), samt HAV RNA. Endelig bevis på en aktuell eller nylig infeksjon er tilstedeværelsen i serum (til og med i en serumprøve) antistoffer mot IgA-klasse IgM (anti-HAV IgM) og tilstedeværelsen av HAV i avføring. Tilstedeværelsen av antistoffer mot HA, samt langvarig immunitet, indikeres ved tilstedeværelse av antistoffer mot HAV IgG-klasse (anti-HAV IgG). Diagnosen av akutt HA er bekreftet i et akutt eller tidlig stadium av utvinning i nærvær av anti-HAV IgM-klasse, som vises i de siste 5-10 dagene av inkubasjonsperioden og fortsetter å bli detektert i 6-7 måneder fra sykdomsbegyndelsen. I tillegg kan disse antistoffene påvises i de første månedene hos individer (20-30%) vaksinert med inaktivert HA-vaksine. Dannelsen er forbundet med den primære immunresponsen mot introduksjonen av antigenet, og ikke til infeksjonen forårsaket av vaksinen. HAV RNA kan detekteres flere dager før økningen i ALT-aktivitet og innen 5 til 59 dager med sykdom med et typisk kurs på HA; I langvarige tilfeller kan HAV RNA måles i gjennomsnitt i opptil 95 dager. Antigenet til HA-viruset (HAV-Ag) finnes i avføring hos pasienter 7-10 dager før kliniske symptomer påbegynnes og i de første dagene av sykdommen, som også brukes til tidlig diagnose og identifisering av kilder til smittestoffet. Konsentrasjonen av HAV i avføringen er den høyeste i 2 uker. før utseendet på gulsott. Hos voksne varer utskillelsen av viruset med avføring vanligvis mindre enn en uke etter utseendet av gulsott. Viruset ble imidlertid også oppdaget etter 2 måneder. fra sykdomsutbruddet (under eksacerbasjon). Barn kan utsette viruset lengre enn voksne, muligens innen noen få uker etter den kliniske manifestasjonen av sykdommen. Kronisk utslipp av HAV fra avføring observeres ikke. Definisjonen av HAV antigen har også funnet anvendelse i sanitær virologi i studiet av vann for tilstedeværelse av et virus. Anti-HAV klasse IgG (figur 4) vises også tidlig i begynnelsen av sykdommen (3-4 uker), fortsetter gjennom livet og gir livslang beskyttelse mot denne sykdommen. Definisjonen av anti-HAV IgG brukes til å studere befolkningens immunologiske struktur og dynamikken til spesifikk humoral immunitet. Bestemmelsen av anti-HAV IgG-klassen er også viktig for pre- og post-vaksinering screening (minimum beskyttelseskonsentrasjon av anti-HAV tilsvarer 20 IE / l). For deres bestemmelse produserer innenlandske produsenter kommersielle diagnostiske enzymimmunoassaypreparater. Laboratoriediagnostikk er basert på deteksjon av markører av HA-viruset ved hjelp av spesifikke immunodiagnostiske metoder - ELISA og RIA-metoder. Innenlandske og utenlandske industrielle bioteknologiske bedrifter produserer diagnostiske sett, inkludert alle nødvendige komponenter og reagenser for testen. I tillegg til fastfase-ELISA og RIA, anvendes også metoden for immunoelektronmikroskopi og metoden for PCR med hell. Alle ovennevnte metoder for immunodiagnostikk med like sannsynlighet avslører inapparent, ikke-symptomløs eller klinisk uttalt former for HA. Et spesielt sted i laboratoriediagnosen av GA er opptatt av molekylære genetiske testmetoder for HAV RNA. PCR-diagnostikk kan oppdage HAV RNA i en konsentrasjon på 40 kopier / ml. For tiden er det en opphopning av data på stedet for PCR i systemet med laboratoriediagnose av GA.

Laboratoriediagnostisering av hepatitt E (HEU) Det etiologiske middel til hepatitt E (HE) er et sfærisk virus uten det ytre skallet, det er et enkeltstrenget RNA-virus med en diameter på 32-34 nm. Ved diagnostisering av HE i hvert tilfelle må det tas hensyn til flere diagnostiske argumenter: - pasienten har et symptomkompleks av akutt og antagelig infeksiøs hepatitt, - et pålitelig unntak fra den etiologiske deltakelsen av HA- og HBV-virus, basert på negative serologiske test - anti-HAV IgM og anti-HBs av IgM-klassen - en grundig analyse av epidemiologiske historiedata, inkludert indikasjoner på siste besøk til endemiske regioner, - en undersøkelse (hvis mulig) av avføring skadet tilstedeværelsen av viruspartikler ved immunelektronmikroskopi CGU, PCR. Det er diagnostiske metoder basert på bruk av immunofluorescerende antistoffer (MFA) for bestemmelse av HEV antigen i avføring og enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) for bestemmelse av antistoffer mot HEV - anti-HEV av IgM og IgG. Tilstedeværelsen av anti-HEV klasse IgM med høy frekvens bestemmes i serum av pasienter med CU i det akutte stadium av sykdommen og i perioden med tidlig utvinning; identifiseringen av anti-HEV IgG-klasse indikerer tidligere HU-infeksjon. For diagnose av GE er HEV RNA også bestemt. Innenlandske produsenter av diagnostiske testsystemer for påvisning av virale hepatittmarkører:

MOSCOW og regionen - NEARMEDIC - ECOlab - BIOSERVICE

NOVOSIBIRSK - VECTOR BEST - VECTOR MBS (MEDICOBIOL.SOYUZ) - VECTOR TIL BIALGAM

LOWER NOVGOROD - MICROGEN (tidligere IMBIO) - DIAGNOSTISKE SYSTEMER ST. PETERSBURG - AVICENNA - AQUAPAST


Neste Artikkel

Giardia i leveren

Flere Artikler Om Leveren

Cyste

Hvordan behandle hepatitt B

Hepatitt B er en viral betennelse i leveren, som er forårsaket av hepatitt B-viruset. I de fleste tilfeller har sykdommen en gunstig prognose. Med en tilstrekkelig respons av immunsystemet til pasientens kropp, fortsetter patologien i en akutt form, karakterisert ved levende symptomatologi.
Cyste

Hva er cholagogue når gallestagnasjon er bedre og mer effektivt?

Cholagogue med gallestasis aktiverer utløpet og forhindrer dermed risikoen for å utvikle mange sykdommer i leveren og galleblæren. Hovedmekanismen for deres handling er å stimulere produksjonen av galle og akselerere fjerning av kroppen fra kroppen.